项目经验

项目案例

FAQ

Q
真核表达选择CHO细胞和293有什么区别?
A

1、细胞来源:CHO细胞是源于中国仓鼠卵巢的细胞系,而293细胞是由人胚胎肾细胞转化而来;

2、生长特性:CHO细胞生长快速,适应多种培养条件,易于扩增;而293细胞的生长速度较慢,需要更高的培养温度和CO2浓度;

3、表达能力:CHO细胞在真核蛋白表达方面具有广泛的应用,尤其擅长表达复杂蛋白质如抗体,而293细胞则被广泛用于表达重组蛋白、病毒载体等领域。

Q
从序列角度看,什么样的序列不利于表达?
A

1、高GC含量:因为GC碱基对的结合能力较强,容易形成稳定的二级结构,影响转录和翻译的进行;

2、异常启动子和调控序列;

3、结构域和翻译慢化区;

4、难以稳定折叠的序列;

5、糖基化修饰多,半胱氨酸含量多的序列。

Q
抗体大量表达和小量表达在技术上的区别?
A

1、培养规模:抗体大量表达通常需要进行大规模培养,使用较大的培养器、培养罐或生物反应器。相比之下,小量表达可以使用小规模培养器,如培养皿、离心管等;

2、细胞密度控制:大量表达往往需要维持较高的细胞密度,以达到更高的蛋白产量。因此,在培养过程中需要采取相应措施,如增加营养物质供应、调整培养基成分等。对于小量表达,细胞密度可以相对较低,并且更注重蛋白质的纯化和分析;

3、表达优化:大量表达的技术流程更注重表达优化,包括优化培养条件、诱导方式、转染效率等,以提高蛋白质的产量和纯度。对于小量表达,优化更侧重于保持适度的表达水平、避免毒性等问题;

4、蛋白纯化:由于大量表达通常会产生较多的目标蛋白质,需要进行更多的纯化步骤来提高纯度。而小量表达可以通过简单的纯化方法(如亲和层析、凝胶过滤)来满足需求。

Q
如何减少抗体表达过程中产生的降解片段?
A

1、使用蛋白酶缺陷型CHO细胞或添加抑制剂(如亮抑酶肽);

2、缩短培养周期,低温(<15℃)储存产物;

3、调整pH(6.8-7.2)抑制蛋白酶活性。

Q
真核表达选择CHO细胞和293有什么区别?
A

1、细胞来源:CHO细胞是源于中国仓鼠卵巢的细胞系,而293细胞是由人胚胎肾细胞转化而来;

2、生长特性:CHO细胞生长快速,适应多种培养条件,易于扩增;而293细胞的生长速度较慢,需要更高的培养温度和CO2浓度;

3、表达能力:CHO细胞在真核蛋白表达方面具有广泛的应用,尤其擅长表达复杂蛋白质如抗体,而293细胞则被广泛用于表达重组蛋白、病毒载体等领域。

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从序列角度看,什么样的序列不利于表达?
A

1、高GC含量:因为GC碱基对的结合能力较强,容易形成稳定的二级结构,影响转录和翻译的进行;

2、异常启动子和调控序列;

3、结构域和翻译慢化区;

4、难以稳定折叠的序列;

5、糖基化修饰多,半胱氨酸含量多的序列。

Q
抗体大量表达和小量表达在技术上的区别?
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1、培养规模:抗体大量表达通常需要进行大规模培养,使用较大的培养器、培养罐或生物反应器。相比之下,小量表达可以使用小规模培养器,如培养皿、离心管等;

2、细胞密度控制:大量表达往往需要维持较高的细胞密度,以达到更高的蛋白产量。因此,在培养过程中需要采取相应措施,如增加营养物质供应、调整培养基成分等。对于小量表达,细胞密度可以相对较低,并且更注重蛋白质的纯化和分析;

3、表达优化:大量表达的技术流程更注重表达优化,包括优化培养条件、诱导方式、转染效率等,以提高蛋白质的产量和纯度。对于小量表达,优化更侧重于保持适度的表达水平、避免毒性等问题;

4、蛋白纯化:由于大量表达通常会产生较多的目标蛋白质,需要进行更多的纯化步骤来提高纯度。而小量表达可以通过简单的纯化方法(如亲和层析、凝胶过滤)来满足需求。

Q
如何减少抗体表达过程中产生的降解片段?
A

1、使用蛋白酶缺陷型CHO细胞或添加抑制剂(如亮抑酶肽);

2、缩短培养周期,低温(<15℃)储存产物;

3、调整pH(6.8-7.2)抑制蛋白酶活性。

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真核表达选择CHO细胞和293有什么区别?
A

1、细胞来源:CHO细胞是源于中国仓鼠卵巢的细胞系,而293细胞是由人胚胎肾细胞转化而来;

2、生长特性:CHO细胞生长快速,适应多种培养条件,易于扩增;而293细胞的生长速度较慢,需要更高的培养温度和CO2浓度;

3、表达能力:CHO细胞在真核蛋白表达方面具有广泛的应用,尤其擅长表达复杂蛋白质如抗体,而293细胞则被广泛用于表达重组蛋白、病毒载体等领域。

Q
从序列角度看,什么样的序列不利于表达?
A

1、高GC含量:因为GC碱基对的结合能力较强,容易形成稳定的二级结构,影响转录和翻译的进行;

2、异常启动子和调控序列;

3、结构域和翻译慢化区;

4、难以稳定折叠的序列;

5、糖基化修饰多,半胱氨酸含量多的序列。

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抗体大量表达和小量表达在技术上的区别?
A

1、培养规模:抗体大量表达通常需要进行大规模培养,使用较大的培养器、培养罐或生物反应器。相比之下,小量表达可以使用小规模培养器,如培养皿、离心管等;

2、细胞密度控制:大量表达往往需要维持较高的细胞密度,以达到更高的蛋白产量。因此,在培养过程中需要采取相应措施,如增加营养物质供应、调整培养基成分等。对于小量表达,细胞密度可以相对较低,并且更注重蛋白质的纯化和分析;

3、表达优化:大量表达的技术流程更注重表达优化,包括优化培养条件、诱导方式、转染效率等,以提高蛋白质的产量和纯度。对于小量表达,优化更侧重于保持适度的表达水平、避免毒性等问题;

4、蛋白纯化:由于大量表达通常会产生较多的目标蛋白质,需要进行更多的纯化步骤来提高纯度。而小量表达可以通过简单的纯化方法(如亲和层析、凝胶过滤)来满足需求。

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A

1、使用蛋白酶缺陷型CHO细胞或添加抑制剂(如亮抑酶肽);

2、缩短培养周期,低温(<15℃)储存产物;

3、调整pH(6.8-7.2)抑制蛋白酶活性。

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2、生长特性:CHO细胞生长快速,适应多种培养条件,易于扩增;而293细胞的生长速度较慢,需要更高的培养温度和CO2浓度;

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